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内容大纲
本书除其他同类书籍已涉及的内容外增加了新的实验技术,如小RNA的分离和杂交、基因的原核和真核表达及蛋白纯化、蛋白互作分析、In fusion基因连接等。在结构上,各种实验技术分章编写,又互相联系成为一个有机整体。在写作上,语言精练,力求深入浅出,通俗易懂,循序渐进,可操作性强。
在编写过程中,本书参考了国内外相关优秀图书与论文,并结合作者自己在科研工作中的实践经验和最新研究成果,以期提高本书的实用性与通用性,使本书不但适合初学者阅读,对具有多年研究工作经历的学者也不失参考价值。
本书既可作为农业和医学院校各专业大学生、研究生生物技术、分子生物学、生物化学、生物物理学、微生物学、遗传学等课程的实验教学用书,也可作为科研人员的实验指导手册。 -
作者介绍
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目录
第一章 质粒DNA的分离、纯化和鉴定
第一节 概述
第二节 碱法提纯质粒DNA
一、设备
二、材料
三、试剂
四、操作步骤
五、注意事项
第三节 Axygen质粒提取试剂盒提纯质粒DNA
一、设备
二、材料
三、试剂
四、操作步骤
五、注意事项
第四节 离心机的使用及注意事项
一、离心机的使用步骤
二、离心机使用的注意事项
第二章 DNA琼脂糖凝胶电泳和RNA甲醛琼脂糖凝胶变性电泳
第一节 概述
第二节 DNA的琼脂糖凝胶
一、设备
二、材料
三、试剂
四、操作步骤
五、注意事项
第三节 RNA甲醛琼脂糖凝胶变性电泳
一、设备
二、材料
三、试剂
四、操作步骤
五、注意事项
第三章 质粒DNA的限制性酶切鉴定、割胶回收与纯化
第一节 概述
第二节 设备、材料及试剂
一、设备
二、材料
三、试剂
第三节 操作步骤
一、标准酶切反应
二、快速酶切反应(TAKARA公司内酶切)
三、酶切产物的电泳分离和鉴定
四、酶切产物的割胶回收
五、注意事项
第四章 特异片段与载体的连接反应
第一节 概述
一、带有非互补黏性末端DNA片段的连接
二、带有相同黏性末端DNA片段的连接
三、带有平末端DNA片段的连接
四、适当改造的DNA片段的连接
五、PCR介导的DNA片段的连接
六、In fusion基因克隆方法
第二节 设备、材料及试剂
一、设备
二、材料
三、试剂
第三节 操作步骤
一、PCR产物的外源片段和pMD18-T载体的TA连接反应(20μl体系)
二、双酶切的外源片段和质粒载体的连接反应(20μl体系)
三、In fusion重组连接反应
四、注意事项
第五章 感受态细胞的制备及连接产物的转化、鉴定
第一节 概述
一、大肠杆菌感受态细胞的制备
二、影响细菌转化率的因素
三、转化子的鉴定
第二节 设备、材料及试剂
一、设备
二、材料
三、试剂
第三节 操作步骤
一、感受态细胞的制备
二、连接产物的热击转化
三、转化子的鉴定
第六章 PCR扩增技术和qPCR技术
第七章 基因组DNA的提取
第八章 动植物总RNA的提取
第九章 RT-PCR技术
第十章 蛋白质的SDS-PAGE电泳及Western blot分析
第十一章 核酸分子杂交技术
第十二章 RFLP和RAPD技术
第十三章 基因的原核表达技术
第十四章 基因的真核表达
第十五章 蛋白互作分析技术
第十六章 酶联免疫吸附试验
附录
参考文献
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