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内容大纲
分子生物学是研究核酸、蛋白质等生物大分子的结构及其在遗传信息和细胞信息传递中的作用规律及相互关系的交叉学科。分子生物学技术的发展日新月异,为人类认识生命现象带来了前所未有的机会,也为人类利用和改造生物创造了极为广阔的前景。
本书编写力求全面反映分子生物学领域新技术的发展,适应创新性人才的培养。书中以细菌细胞、酵母细胞、哺乳动物细胞以及提取原代的腹腔巨噬细胞作为研究模型,安排基础的分子生物学相关实验,通过这些实验技术的操作,使学生循序渐进掌握基础的分子生物学基本技术和实验技能,从而具备独立开展原核和真核相关分子生物学课题研究的能力。
本教材适用于高等学校生物工程、生物技术、生物科学等专业分子生物学实验技术的教学,也可作为生物学专业研究生或相关领域实验人员的参考书。 -
作者介绍
靳远祥,教授,博士生导师,浙江工业大学生物工程学院生物资源与生物环保研究所所长。浙江省杰出青年基金获得者。主要从事生物活性物质功效机理、外泌体与肠道微环境调控、环境毒理等方面的研究。主持国家自然科学基金、省杰出青年基金、省重点基金项目等10余项,作为骨干参与国家重点基金项目、国家重点研发计划课题、省领雁项目等。获江西省自然科学奖二等奖1项、浙江省自然科学奖三等奖1项。以第一或通讯作者发表学术论文150余篇。 -
目录
第一章 实验室基础知识
第二章 重组DNA分子克隆的制备及鉴定
实验一 动物肝组织中总RNA的提取及测定
实验二 琼脂糖凝胶电泳检测
实验三 逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增克隆基因
实验四 DNA胶回收及鉴定
实验五 感受态细胞的制备
实验六 DNA连接、细菌转化及筛选
实验七 菌落PCR
实验八 质粒提取及外源基因的酶切鉴定
实验九 一步克隆法制备绿色荧光蛋白(GFP)重组大肠杆菌
实验十 大肠杆菌中GFP的诱导表达及荧光显微镜观察
第三章 外源基因在酿酒酵母中的表达与鉴定
实验十一 外源基因的扩增
实验十二 质粒的构建
实验十三 表达载体的构建
实验十四 表达载体的遗传转化
实验十五 SDS-PAGE鉴定蛋白质表达
实验十六 蛋白质印迹法鉴定蛋白质表达
第四章 哺乳动物细胞的实验操作
实验十七 小鼠肝脏原代细胞培养
实验十八 哺乳细胞的复苏、培养及冻存
实验十九 MTT法检测化疗药物紫杉醇对细胞活力的影响
实验二十 CCK-8法检测化疗药物紫杉醇对细胞活力的影响
实验二十一 结晶紫染色观察化疗药物紫杉醇对细胞增殖的影响
实验二十二 脂质体介导的EGFP质粒细胞转染及显微镜观察
实验二十三 实时荧光定量PCR检测EGFP基因在细胞中的表达水平
第五章 腹腔巨噬细胞的提取及功能研究
实验二十四 腹腔巨噬细胞的分离提取及形态观察
实验二十五 RT-qPCR检测LPS诱导腹腔巨噬细胞细胞因子mRNA水平表达
实验二十六 ELISA检测LPS诱导腹腔巨噬细胞细胞因子的分泌
实验二十七 流式细胞仪测定腹腔巨噬细胞M1/M2型极化
第六章 实验样品的保存处理
第七章 实验室工作人员的基本素质与行为准则
附录
附录一 实验室常用试剂和培养基的配制方法
附录二 生物类废弃物的处理方法
参老文献
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