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内容大纲
《合成生物学基础实验教程》结合最新科研成果与实验技术,系统介绍了合成生物学领域中的核心基础实验技术,特别针对丝状真菌、大肠杆菌及解脂耶氏酵母等微生物的实验操作,涵盖了同源重组、CRISPR基因编辑、农杆菌介导转化、荧光蛋白共表达、RNA干扰等基础和前沿技术,每个实验章节按照实验的目的、原理、材料和仪器设备、步骤、结果进行详细阐述,配有思考题,帮助学生深入理解实验背后的科学原理与技术应用。
本教材注重基础实验技能与科研能力的并行培养,可作本科生和研究生的实验教学用书,也能为科研人员提供实践操作的参考,是合成生物学教学与科研实践的重要参考工具。 -
作者介绍
张驰,南京师范大学副教授,长期从事合成生物学及其在食品、制药领域的应用研究。主攻非模式丝状真菌的生长代谢机理及有机酸、抗生素的合成,已在国际知名期刊上发表SCI论文二十余篇,包括F1000和高被引论文各一篇,申请国家发明专利10项。开发的微同源臂介导的曲霉CRISPR体系,被多国的研究学者借鉴。主持国家自然科学基金青年项目一项,并参与多个企业横向合作项目。同时还担任如mBio等权威期刊的审稿人,并致力于教学改革,主持教育部教改项目“基因编辑课程建设”。科研和教学成果多次获奖,尤其在生物技术竞赛及iGEM大赛多次获得佳绩。 -
目录
第一章 同源重组策略敲除丝状真菌基因
实验1 巢式PCR技术融合三段目的DNA
实验2 丝状真菌原生质体制备
实验3 丝状真菌原生质体转化
第二章 CRISPR-Cas9体系介导体外DNA切割
实验4 Cas9蛋白的表达与纯化
实验5 sgRNA的设计
实验6 sgRNA的体外合成
实验7 CRISPR-Cas9体外切割DNA
第三章 CRISPR-Cas9体系介导体内DNA编辑
实验8 CRISPR-Cas9介导丝状真菌的基因敲除
实验9 CRISPR-Cas9介导丝状真菌的基因敲入
实验10 CRISPR-Cas9介导丝状真菌的基因原位点突变
实验11 CRISPR-Cas9介导丝状真菌的多基因编辑
第四章 CRISPR-Cas体系介导大肠杆菌的单碱基编辑
实验12 质粒pnSpCas9-TadCD-TadCD转入大肠杆菌
实验13 打靶质粒pTarget的构建
实验14 质粒pTarget的电转化以及碱基编辑检测
第五章 解脂耶氏酵母的基因组编辑
实验15 Golden Gate一步克隆构建GFP和DsRed共表达质粒
实验16 解脂耶氏酵母的LiAc/PEG转化
实验17 Western blot检测GFP在解脂耶氏酵母中表达
实验18 DNA Assembly(DNA组装)和URA-blaster体系介导解脂耶氏酵母的基因组定点多轮编辑
第六章 农杆菌介导转化技术在真菌中的应用
实验19 构建表达GFP的农杆菌载体
实验20 农杆菌转化技术介导GFP在出芽短梗霉中表达
实验21 荧光定量PCR检测GFP表达
第七章 RNA干扰技术在真菌中的应用
实验22 RNA干扰介导丝状真菌基因低表达
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