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内容大纲
本书以分子检测技术的方法为主线,从核酸和蛋白质的基本理化性质,系统介绍了分子检测的原理及应用,包括核酸和蛋白质的分离纯化方法,分子杂交的原理和方法,聚合酶链反应(PCR)原理、检测技术和方法,核酸测序原理和方法,全基因组拼接的方法与策略,基因芯片技术的原理和方法,蛋白质的电泳、印迹、质谱技术,以及分子检测技术在转基因上的应用等内容。
本书既可以作为高等院校生物科学、生物工程、生物技术、生物医学工程、动植物检疫、卫生检验与检疫和农学等相关专业本科生教材,也可作为科研院所、检测机构、医院、生物企业的技术人员的参考书。 -
作者介绍
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目录
第一章 绪论
第一节 分子检测技术的研究对象
第二节 分子检测技术的发展史
一、分子检测技术的起步阶段
二、基于杂交手段的分子检测技术阶段
三、基于PCR手段的分子检测技术阶段
四、基于生物芯片技术的高通量分子检测技术阶段
五、基于测序的分子检测技术阶段
第三节 分子检测技术的应用及展望
一、在病原体诊断中的应用及发展
二、在遗传性疾病诊断中的应用及发展
三、在肿瘤分子诊断中的应用及发展
四、在动植物和微生物种质资源和新品种鉴定中的应用及发展
五、在其他领域中的应用及发展
思考题
第二章 核酸的基本性质及分离
第一节 核酸的理化性质
一、核酸的一般物理性质
二、核酸的紫外吸收
三、核酸的酸碱性质及两性解离
四、核酸的水解
五、核酸的变性、复性与杂交
第二节 核酸提取及分离纯化
一、核酸提取及分离纯化的步骤、原理及注意事项
二、核酸提取及分离纯化的主要方法及操作
思考题
第三章 核酸分子杂交技术
第一节 核酸分子杂交技术的基本原理
一、核酸的变性
二、核酸的复性
第二节 核酸探针
一、探针种类
二、探针标记
第三节 核酸分子杂交技术常用方法
一、固相杂交
二、液相杂交
三、原位杂交
第四节 核酸分子杂交结果的检测及影响因素
一、放射性标记探针杂交结果的检测
二、非放射性标记探针杂交结果的检测
三、影响因素
第五节 核酸分子杂交技术的应用
一、Southern印迹法
二、Northern印迹法
三、原位杂交
四、液相杂交
思考题
第四章 聚合酶链反应及其相关技术
第一节 聚合酶链反应的历史
一、Khorana的DNA复制理论
二、Mulis的PCR扩增
三、PCR操作的自动化
第二节 PCR原理
一、PCR的步骤
二、PCR的扩增效率
第三节 PCR反应体系
一、模板
二、引物
三、PCR用酶——耐热性DNA聚合酶
四、镁离子
五、缓冲液
六、脱氧核苷三磷酸(dNTPs)
第四节 PCR循环的参数控制
一、模板DNA变性评估
二、DNA变性考虑因素
第五节 PCR方法
一、热启动PCR
二、降落PCR
三、上升PCR
四、巢式PCR
五、快速PCR
六、直接PCR
七、高GC含量PCR
八、多重PCR
九、长片段PCR
十、反向PCR
第六节 反转录PCR
一、逆转录酶的发现
二、一步法和两步法RT-PCR
三、RT-PCR的构建
四、RT-PCR的应用
第七节 实时荧光定量PCR
一、荧光定量PCR介绍
二、荧光定量PCR检测方法
思考题
第五章 核酸测序技术
第一节 第一代测序技术
一、双脱氧链终止法测序技术
二、化学断裂法测序
三、自动化测序技术
第二节 第二代测序技术
一、基本原理
二、测序文库的构建
三、测序的方法
四、二代测序技术的特点
第三节 第三代测序技术
一、Helicos BioScience tSMS技术
二、PacBio的SMRT测序技术
三、牛津大学纳米孔(Nanopore)单分子测序技术
第四节 全基因组测序的拼接方法和策略
一、拼接的基本原理与挑战
二、主要的拼接方法与策略
三、拼接策略的选择:从短读到长读的演进
四、拼接结果的评估
第五节 核酸测序技术的应用
一、测序在基因组研究中的应用
二、RNA测序及其应用
三、全基因组测序
四、基因组测序发展趋势
思考题
第六章 DNA芯片技术
第一节 DNA芯片技术的原理与特点
一、生物芯片与DNA芯片
二、DNA芯片技术的基本原理与特点
第二节 常用DNA芯片的设计与制备
一、探针的设计
二、载体的选择与预处理
三、DNA芯片的制备
第三节 DNA芯片技术检测的基本流程
一、样品的制备
二、杂交反应与结果分析
第四节 DNA芯片技术的应用
思考题
第七章 蛋白质的理化分析技术
第一节 蛋白质的基本理化性质
一、元素组成
二、分子量
三、两性解离及等电点
四、溶解性
五、蛋白质的光学性质
第二节 蛋白质定量分析技术
一、凯氏定氮法
二、双缩脲法与Folin-酚试剂法
三、二喹啉甲酸法
四、Bradford法
五、紫外吸收法
第三节 蛋白质的电泳分析技术
一、纸电泳
二、醋酸纤维素薄膜电泳
三、聚丙烯酰胺凝胶电泳
四、等电聚焦电泳
五、双向电泳
六、琼脂糖凝胶电泳
第四节 光学分析技术在蛋白质结构分析中应用
一、紫外吸收光谱法
二、红外光谱法
三、拉曼光谱法
四、圆二色谱
五、荧光光谱法
思考题
第八章 蛋白质的检测技术
第一节 蛋白质印迹技术
一、蛋白质印迹技术原理
二、蛋白质印迹技术的操作步骤
三、蛋白质印迹技术应用进展
第二节 蛋白质芯片技术
一、蛋白质芯片技术原理
二、蛋白质芯片技术的操作步骤
三、蛋白质芯片技术特点
四、蛋白质芯片技术未来的发展趋势
第三节 蛋白质检测技术的应用
一、在生物医学研究上的应用
二、在食品安全检测上的应用
三、在农业科研领域的应用
四、在环境监测上的应用
思考题
第九章 质谱技术
第一节 质谱技术的原理和概念
第二节 肽质量指纹图谱鉴定蛋白质技术
一、肽质量指纹图谱检测原理
二、基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱仪(MALDI-TOFMS)检测蛋白质
三、肽质量指纹图谱技术的优缺点
四、肽质量指纹图谱的应用
第三节 质谱技术的应用
一、生物医学研究
二、药物开发与药代动力学
三、环境科学
四、食品安全
五、材料科学
六、法医鉴定
思考题
第十章 转基因及基因编辑的检测
第一节 细菌的转化技术
一、细菌转化的原理
二、细菌转化的方法与步骤
第二节 植物的转化技术
一、间接转化法——农杆菌介导转化法
二、直接转化法
第三节 动物的转基因技术
一、逆转录病毒感染法
二、DNA显微注射法
三、基因打靶技术
四、精子载体法
五、体细胞核移植法
六、动物转基因技术的基本步骤
第四节 基因编辑
一、基因编辑与DNA的损伤修复
二、基因编辑技术
第五节 转基因及基因编辑的检测技术
一、转基因检测技术原理及特点
二、基因编辑检测技术原理及特点
思考题
第十一章 实验指导
实验一 利用分子标记技术进行基因型鉴定
一、实验目的
二、实验原理
三、实验仪器及材料
四、实验步骤
思考题
实验二 利用16S rDNA测序进行菌种鉴定
一、实验目的
二、实验原理
三、实验仪器及材料
四、实验步骤
思考题
实验三 利用18S rDNA或ITS序列进行真核生物鉴定
一、实验目的
二、实验原理
三、实验仪器及材料
四、实验步骤
思考题
实验四 Southern印迹法
一、实验目的
二、实验原理
三、实验仪器及材料
四、实验步骤
思考题
实验五 细菌感受态制备、转化及转化子的鉴定
一、实验目的
二、实验原理
三、实验仪器及材料
四、实验步骤
思考题
参考文献
附录
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